Técnica de PCR para el diagnóstico del Virus del Papiloma Humano (VPH)

Tema: Diagnóstico del virus del papiloma humano. 

Objetivo: Facilitar el diagnóstico de la infección por el virus del papiloma humano (VPH) mediante el uso de la técnica de PCR, la cual permite amplificar regiones específicas del ADN del virus.

Muestra: Raspado cervical.

Tipo de ácido nucleico extraído: ADN viral.

Gen o secuencia a amplificar: Región del gen viral L-1, utilizando indicadores universales MY09-MY11.

Tamaño en pares de bases del gel: 450 pares de bases (pb).

Tipo de PCR: PCR simple.

Visualización: Los productos amplificados se revelaron en gel de agarosa y se visualizaron mediante un sistema analizador de geles. Los resultados fueron cualitativos.

Método de extracción del ADN

Pasos: 

 -Preparación de las células: Las muestras fueron almacenadas en medio de transporte adecuado

 -Lisis: Se realizó lisis enzimática.

 -Separación/precipitación: Se utilizó la técnica de fenol-cloroformo para extraer y purificar el ADN.

Amplificación: Se usaron iniciadores universales MY09/MY1

Volumen de reacción: 50 µl.

Cantidad de ADN utilizada: 5 µl de ADN purificado.

Número de copias:Los productos amplificados (amplicones) es de 450 pares de bases. 

Hibridación: Se utilizó una temperatura de alineación de 58 °C durante 1:30 minutos por 40 ciclos.

Resultados: Se identificaron 341 genotipos en 207 pacientes, siendo los más frecuentes los genotipos 16 (10.3%), 52 (8.8%) y 59 (8.6%). Las infecciones múltiples estuvieron presentes en el 42.7% de los casos. 

Imagen obtenida de: https://www.scielo.org.mx/pdf/prh/v37n3/2524-1710-prh-37-3-115.pdf

Referencia Bibliográfica: 

1. García-Romero Carmen S., Soriano-Becerril Diana M., Sam-Soto Selene, Flores-Medina Saúl. Genotipificación del virus del papiloma humano en mujeres embarazadas VPH positivas. Perinatol. Reprod. Hum.  [revista en la Internet]. 2023 Dic [citado  2024  Dic  08] ;  37( 3 ): 115-121. Disponible en: https://www.scielo.org.mx/pdf/prh/v37n3/2524-1710-prh-37-3-115.pdf   

Alteración de la Epignética de la Diabetes Tipo 2

Alteración de la epigenética de la diabetes tipo 2

El polimorfismo VNTR (número variable de repeticiones en tándem) del trinucleótido CAG en el gen ATXN2 se asocia con alteraciones epigenéticas que contribuyen al desarrollo de la diabetes mellitus tipo 2. Este polimorfismo afecta la actividad del gen, implicando la regulación de proteínas como la ataxina-2, la cual influye en la resistencia a la insulina y la obesidad. Además, la metilación del ADN y otras modificaciones epigenéticas en este locus pueden contribuir a la disfunción metabólica y al riesgo cardiovascular.

Imagen obtenida de: https://es.123rf.com/photo_207003884_diagrama-de-esquema-de-explicaci%C3%B3n-anat%C3%B3mica-de-diabetes-tipo-2-y-resistencia-a-la-insulina.html 

Referencia Bibliográfica: 

1.	Cabrera Beltrán CJ, Castillo Solano FD. Polimorfismo (cag) del gen atxn2 como factor de riesgo relacionado con diabetes mellitus tipo 2. Revista Vive [Internet]. 2023;6(16) [citado 2024 Dic 1] :309–21.Disponible en: https://portal.amelica.org/ameli/journal/541/5414343028/5414343028.pdf

 Alteraciones de la traducción del VIH

 

Las alteraciones en la traducción del VIH, especialmente de los provirus defectuosos, generan productos proteicos anormales. Estos productos incluyen proteínas virales no canónicas y epítopos crípticos que pueden activar respuestas inmunitarias anómalas. La persistencia de estas proteínas, incluso bajo tratamiento antirretroviral, perpetúa la inflamación crónica y afecta negativamente la función de las células T CD4+ y CD8+. Además, la traducción de ARN defectuosos puede inducir señales inflamatorias a través de la detección por receptores de reconocimiento de patrones (PRRs).

Imagen obtenida de: https://www.mdpi.com/1999-4915/16/5/751

Referencias Bibliográfica: 

1. Kilroy JM, Leal AA, Henderson AJ. Chronic HIV transcription, translation, and persistent inflammation. Viruses [Internet]. 2024 May [cited 2024 Nov 24];16(5):751. Available from: https://www.mdpi.com/1999-4915/16/5/751

Alteraciones en la transcripción de la sepsis

 Alteraciones de la transcripción de la sepsis 

Las alteraciones en la transcripción en la sepsis están afectadas por cambios en la metilación del ADN de los monocitos. Estos cambios afectan genes relacionados con la respuesta inmune, como IL1A, CCL22 y STAT3, y están correlacionados con niveles elevados de citocinas inflamatorias como IL-10 e IL-6. La metilación anormal estabiliza fenotipos alterados de los monocitos, contribuyendo a la disfunción orgánica observada en la sepsis. Además, la estimulación de los receptores tipo Toll en monocitos induce cambios similares en la metilación del ADN, promoviendo un estado de tolerancia endotóxica.

Imagen obtenida de: https://link.springer.com/article/10.1186/s13073-019-0674-2#Fig6

Referencia Bibliográfica: 

1. Lorente-Sorolla C, Garcia-Gomez A, Català-Moll F, Toledano V, Ciudad L, Avendaño-Ortiz J. et al. Inflammatory cytokines and organ dysfunction associate with the aberrant DNA methylome of monocytes in sepsis. Genome Med. [Internet].  2019 Oct [cited 2024 Nov 17]; 11:66. Available from: https://link.springer.com/article/10.1186/s13073-019-0674-2

Alteración de la replicación del COVID-19 

Las alteraciones en la replicación del SARS-CoV-2 se deben a su genoma de ARN monocatenario positivo, que codifica proteínas esenciales. La replicación del ARN viral se inicia tras la entrada del virus, donde la proteína Spike (S) del virus se une al receptor ACE2 de la célula. Una vez dentro, el ARN viral se traduce en poliproteínas que se procesan en proteínas no estructurales, cruciales para la replicación del genoma viral. Las proteínas estructurales como la nucleocápside (N), membrana (M) y envoltura (E) se ensamblan con el ARN replicado para formar nuevas partículas virales.

Imagen obtenida de: https://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0718-381X2020000300331

Referencia Bibliográfica: 

1. Pastrian-Soto Gabriel. Bases Genéticas y Moleculares del COVID-19 (SARS-CoV-2). Mecanismos de Patogénesis y de Respuesta Inmune. Int. J. Odontostomat.  [Internet]. 2020  Sep [citado  2024  Nov  10] ;  14( 3 ): 331-337. Disponible en:http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0718-381X2020000300331&lng=es. http://dx.doi.org/10.4067/S0718-381X2020000300331.

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Hola a todos los lectores, les saluda Daniela Neppas, estudiante de medicina de la Universidad Central del Ecuador. Estoy muy emocionada de compartir y adquirir conocimiento sobre Biología Celular y Molecular con ustedes. Espero que les sea útil y comprensiva toda la información que compartiré por medio de este blog. Además, espero que encuentren inspiración en este blog y se animen a compartir información sobre sus intereses. Bienvenidos a esta aventura y gracias por formar parte de esta comunidad.