Terapia Epigenómica en artritis reumatoide 

• Tema: Respuesta al tratamiento epigenómico para la artritis reumatoide (AR) con (metotrexato/MTX).

• Mecanismo epigenómico tratado: Metilación del ADN 

• ¿Cómo se hizó?: En la artritis reumatoide se ha detectado una alteración en la metilación del ADN en células T, B, monocitos y células T de memoria CD4. Para mitigar este efecto, se ha creado un epifármaco (MTX) que regula la metilación en estas células, inhibiendo las enzimas DHFR y ADN-metiltransferasas (DNMTs)

• Resultados:

            -Tras un mes de tratamiento con MTX, se observaron incrementos significativos en el porcentaje             de 5 mC en células T, B y monocitos, lo que evidenció una reducción en la actividad de la artritis             reumatoide.

            -Al analizar los niveles de metilación en dos subconjuntos distintos de células T CD4+, el 80%                de las posiciones diferencialmente metiladas (DMP) presentaron niveles de metilación                            reducidos. En contraste, en las células T CD4+ vírgenes, se observaron porcentajes similares                    para las posiciones tanto hipo como hipermetiladas.

            -Dos genes, GRID2IP y PLEKHM1P1, presentaron niveles disminuidos de metilación en las                     células T de memoria.

Imagen obtenida de: https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC9412998/figure/pharmaceutics-14-01648-f001/

Referencia Bibliográfica: 

1. 1.Madrid-Paredes A, Martín J, Márquez A. -Omic Approaches and Treatment Response in Rheumatoid Arthritis. Pharmaceutics [Internet]. 2022 Aug 8 [citado el 23 de febrero de 2025];14(8):1648–8. Disponible en: https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC9412998/

Técnicas de edición de ácidos nucleicos en la amaurosis congénita de Leber

Técnicas de edición de ácidos nucleicos en la amaurosis congénita de Leber: Revisión sobre terapia génica aprobada y recuperación visual en la amaurosis congénita de Leber por mutación en el gen RPE65.

Tipo de Edición: In vivo, somática.

Dirigido hacia: El enfoque está en el gen RPE65, esencial para el ciclo visual y la renovación del 11-cis-retinol. Su ausencia resulta en una reducción de los niveles de 11-cis-retinol y en la acumulación de sustancias perjudiciales.

Dirgido por: Se emplean vectores virales adeno-asociados, específicamente el serotipo 2 (AAV2), para transferir el gen corregido RPE65. Además, se utiliza el sistema CRISPR-Cas9 con ARN guía (sgRNA) diseñado para abordar de manera precisa las mutaciones en el gen RPE65. Este método permite corregir directamente las variantes patogénicas en el ADN de las células fotorreceptoras, lo que restablece la producción de la proteína RPE65 y mejora la función visual en pacientes con pérdida de visión relacionada con estas mutaciones.

Órgano a tratar:La retina, en particular el epitelio pigmentario retiniano y las células fotorreceptoras.

Vía de administración: Administración mediante inyección subretinal de una dosis única de voretigene neparvovec en cada ojo (1.5x10^11 genomas vectoriales por ojo en un volumen total de 0.3 ml), con un intervalo mínimo de 6 días entre las aplicaciones.

Resultados: 

• A corto plazo: Se registraron mejoras clínicas y estadísticamente significativas en la capacidad de desplazarse en condiciones de baja iluminación, lo que refleja un aumento en la sensibilidad a la luz y mejores resultados en las pruebas de respuesta visual. Esto sugiere que los fotorreceptores empiezan a recuperar su funcionalidad tras la administración del tratamiento.

• A mediano plazo: Los efectos clínicos iniciales se mantuvieron a lo largo del tiempo, mostrando mejoras sostenidas en la capacidad visual y la movilidad bajo condiciones de baja iluminación. Se siguieron analizando los datos de seguimiento para evaluar la durabilidad de los beneficios de la terapia.

• A largo plazo: Los efectos de la terapia persistieron hasta 4 años después de la administración, con planes de continuar evaluando los resultados durante un seguimiento total de 15 años. El objetivo principal es lograr una restauración permanente de la visión, con la expectativa de que la expresión sostenida del gen RPE65 prevenga la progresión de la enfermedad y mejore significativamente la calidad de vida de los pacientes.

Imagen obtenida de: https://www.macula-retina.es/eficacia-seguridad-y-durabilidad-de-luxturna-en-ensayos-de-fase-1-y-3/

Referencia Bibliográfica: 

1. Ciccioli M. Vista de Revisión sobre terapia génica aprobada y recuperación visual en la amaurosis congénita de Leber por mutación en el gen RPE65 [Internet]. Revistaoce.com. 2024 [citado el 14 de febrero de 2025]. Disponible en: https://revistaoce.com/index.php/revista/article/view/284/482

Terapia con células madre mesenquimales: una revisión de ensayos clínicos para la esclerosis múltiple

Tipo de Stem Cell: Células madre mesenquimales derivadas de diferentes fuentes: 

                                    -Médula ósea (BM-MSC)

                                    -Tejido adiposo humano (AD-MSC)

                                    -Cordón umbilical (UC-MSC)

Método de Obtención: 

• BM-MSC: Se obtienen mediante aspiración del tejido de médula ósea, comúnmente de la pelvis o el esternón, usando una aguja bajo anestesia. Luego, la médula extraída es procesada para aislar estas células madre.
• AD-MSC: Se obtienen mediante liposucción del tejido adiposo del abdomen y de la cadera. El tejido adiposo extraído es sometido a digestión enzimática para liberar las MSC.
• UC-MSC: Se obtienen del tejido de la gelatina de Wharton en el cordón umbilical. Este tejido es procesado para extraer las MSC, que luego son aisladas y expandidas mediante técnicas de cultivo celular para su uso en tratamientos clínicos.

Vía de administración: Las BM-MSC, AD-MSC Y UC-MSC se administraron por vía intravenosa, lo que permite que las células viajen a través del torrente sanguíneo

US-MSC se administró durante 7 visitas (20 x 106 UC-MSC/día).

Resultados: 

    -Corto plazo: El uso de las MSC ha demostrado ser seguro, sin reportar efectos adversos significativos. Se han observado mejoras en los síntomas clínicos y en la puntuación de discapacidad en los primeros meses después de la infusión.

    -Mediano plazo: 

-A los 12 meses después del tratamiento, se observaron cambios en la respuesta inmunológica. Hubo una mejora en las pruebas de función neurológica y en la puntuación de EDSS.

-Las resonancias magnéticas del cerebro y de la médula espinal cervical mostraron que 15 de los 18 sujetos presentaban lesiones inactivas después de un año.

-Se observó una disminución tanto de la inflamación como de la desmielinización en el SNC.

-Los resultados neuroconductuales mejoraron y se redujo la infiltración inflamatoria, así como la desmielinización en la médula espinal.

    -Largo plazo: Aunque no está completamente claro, el tratamiento puede estabilizar la progresión de la discapacidad, con mejoras sostenidas en la puntuación EDSS. Además, puede restaurar la función de las células T reguladoras (Tregs), ayudando a controlar la respuesta inmune.

Tabla obtenida de: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2352320422000669?via%3Dihub#tbl2

Referencia Bibliográfica:

1. Mirmosayyeb O, Meamar R, Tanhaie AP, Eskandari N, Shaygannejad V. Mesenchymal stem cell therapy in multiple sclerosis: An updated review of the current clinical trials. Mult Scler Relat Disord [Internet]. 2014;3(6):750. Disponible en:https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2352320422000669?via%3Dihub

Nuevos modelos transgénicos para el estudio de la enfermedad de Parkinson basados en sistemas de edición con nucleasas

Tema: Nuevos modelos transgénicos para el estudio de la enfermedad de Parkinson basados en sistemas de edición con nucleasas

Tipo de animal transgénico:

     -Ratón transgénico knock-in: Se utilizó la mutación puntual Vps35 D620N para estudiar la                  patogénesis de PARK17 en la enfermedad de Parkinson de aparición tardía.

     -Cerdos domésticos knock-out: Se generaron cerdos homocigotos dobles knock-out para los genes PARK2 y PINK1, utilizando CRISPR/Cas9.

¿Cómo fue obtenido?

Ratón transgénico knock-in:

1. Selección de genes:Se seleccionó el gen Vps35 con la mutación puntual D620N.
2. Vector CRISPR/Cas9: Se diseñaron sgRNAs (single guide RNAs) para dirigir la nucleasa Cas9 al sitio específico del gen Vps35.
3. Microinyección en embriones: La co-inyección de mRNACas9 y sgRNA se realizó en embriones de ratón en estado unicelular.
4. Selección y validación de crías: Se seleccionaron y validaron las crías mediante secuenciación para confirmar la correcta edición del genoma y la presencia de la mutación Vps35 D620N.

Cerdos domésticos knock-out:

1. Selección de genes: Se seleccionaron los genes PARK2 y PINK1.
2. Vector CRISPR/Cas9: Se diseñaron sgRNAs para dirigir la nucleasa Cas9 a los sitios específicos de los genes PARK2 y PINK1.
3. Micro-inyección en embriones: Se co-inyectaron mRNACas9 y sgRNAs en embriones pronucleares de cerdos.
4. Transferencia de embriones: Los embriones editados se transfirieron a cerdas receptoras para la gestación.
5. Selección y validación de crías: Se validaron las crías mediante análisis de secuenciación para confirmar la eliminación (knock-out) de los genes PARK2 y PINK1.

¿Para qué fue obtenido?

A. Para simular tal enfermedad: Los modelos fueron obtenidos principalmente para simular la enfermedad de Parkinson y estudiar su patogénesis, especialmente las formas autosómicas recesivas (PARK2 y PINK1) y la de aparición tardía asociada a mutaciones puntuales (PARK17). Estos modelos transgénicos son herramientas valiosas para comprender mejor la etiología y los mecanismos moleculares de la enfermedad de Parkinson y para el desarrollo de terapias eficaces (1).

Imagen obtenida de: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0213485317303067?ref=pdf_download&fr=RR-2&rr=90bdc900ecf2325a&__cf_chl_tk=dZvVf3XrItY3W8_eU_Y2K7hBnsuv1vggS0yXV2OI5QE-1738547386-1.0.1.1-_vN0.F.Yr67MDQ7cP1c3SN7Oi2Zl665F6Iz7PtZrOhs#fig0005

5 Ventajas y 5 desventajas de los transgénicos

Ventajas

1. Los animales transgénicos son útiles como modelos para investigar la progresión de enfermedades humanas, como el Alzheimer y la fibrosis quística.
2. Se pueden producir grandes cantidades de proteínas, como la insulina, para el tratamiento de la diabetes.
3. Los cultivos transgénicos tienen la capacidad de soportar condiciones extremas como sequías, heladas o plagas, asegurando una mayor productividad en situaciones adversas.
4. Es posible conservar especies en peligro de extinción mediante la inserción de genes que aumentan su resistencia a enfermedades y su adaptabilidad a cambios ambientales.
5. A través de animales transgénicos, se logra una producción eficiente de vacunas y anticuerpos monoclonales (2,3).

  Desventajas

1. Pueden provocar la resistencia a los antibióticos en gérmenes que afectan la salud humana, así como en aquellos que impactan la producción ganadera o avícola.
2. Los organismos modificados genéticamente pueden causar reacciones alérgicas en los consumidores, por lo que es crucial etiquetar adecuadamente los productos que contienen estos organismos.
3. Se puede perder el acceso a medicamentos de origen vegetal (fitofármacos) o de hongos (antibióticos) debido a la pérdida de biodiversidad o la contaminación con genes transgénicos.
4. Los animales modificados genéticamente podrían cruzarse con poblaciones silvestres, poniendo en riesgo la biodiversidad.
5. Los cultivos resistentes a herbicidas pueden dar lugar al surgimiento de malezas súper resistentes, lo que a su vez podría incrementar el uso de herbicidas más potentes y tóxicos, afectando la salud humana (2,3).

Referencias Bibliográficas: 

1. Cota-Coronado JA, Sandoval-Ávila S, Gaytan-Dávila YP, Diaz NF, Vega-Ruiz B, Padilla-Camberos E, et al. Nuevos modelos transgénicos para el estudio de la enfermedad de Parkinson basados en sistemas de edición con nucleasas. Neurologia [Internet]. 2020;35(7):486–99. Disponible en: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0213485317303067

2.Organismos Transgénicos Ventajas y Riesgos [Internet]. Unirioja.es. [citado el 2 de febrero de 2025]. Disponible en: https://dialnet.unirioja.es/servlet/articulo?codigo=9510728 

3.Oviedo M. Ventajas Y Desventajas de los Alimentos Transgénicos [Internet]. La Guía de las Vitaminas. 2015 [citado el 2 de febrero de 2025]. Disponible en: https://laguiadelasvitaminas.com/ventajas-y-desventajas-de-los-alimentos-transgenicos/

ADN Recombinante Artificial en el Cáncer de Próstata y Ácidos Nucleicos Recombinantes en la Naturaleza.

ADN recombinante artificial en el cáncer de próstata.

Tema: IL-15 citotópica (cito-) como nueva inmunoterapia para el cáncer de próstata: producción recombinante en Escherichia coli y purificación.

Objetivo: Mejorar los métodos de producción y purificación de una variante recombinante modificada de la IL-15 humana, y evaluar la eficacia de la proteína obtenida en el tratamiento de tumores de próstata.

Gen o secuencia a clonar: Gen cito-IL-15 

Enzimas de restricción: Nde I y Hind III

Enzima ligasa: No se especifica 

Vector: Vector de expresión pET30a

Célula receptora: Procariota- Escherichia coli BL21

Mecanismo de transferencia o inserción del gen: Por medio de choque térmico se da la transferencia de Escherichia coli BL21

Métodos de identificación de clones: Los clones positivos fueron seleccionados y cultivados a 37 °C con agitación a 180 rpm en matraces Erlenmeyer de 2 litros que contenían 440 ml de medio terrific broth (TB) suplementado con 30 μg/ml de kanamicina. Cuando la densidad óptica (DO) a 600 nm alcanzó un valor de 0,6, las células se enfriaron a 4 °C durante aproximadamente 15 minutos, se indujeron con 0,5 mM de isopropil β-d-1-tiogalactopiranósido (IPTG) y se incubaron a 16 °C por 16 horas bajo agitación a 180 rpm. Posteriormente, las células fueron recolectadas mediante centrifugación a 2500 x g durante 10 minutos.

Imagen obtenida de: https://www.frontiersin.org/files/Articles/755764/fmolb-08-755764-HTML/image_m/fmolb-08-755764-g002.jpg

Ácidos nucleicos recombinantes en la naturaleza.

Los bacteriófagos, como el fago Lambda que infecta a E. coli, contienen material genético (ADN o ARN) protegido por una cápside. Durante el ciclo lisogénico, el fago Lambda inyecta su ADN en la bacteria, donde se integra en una región específica del cromosoma. En esta combinación los ácidos nucleicos recombinantes emergen cuando el material genético del bacteriófago se integra en el genoma de la bacteria, llamada profago, se replica junto con el ADN bacteriano durante la división celular, asegurando su propagación.

Imagen obtenida de: https://www.revista.unam.mx/wp-content/uploads/v22_n4_a1.pdf

Referencias Bibliográficas: 

1. Esteves AM, Papaevangelou E, Smolarek D, Dasgupta P, Galustian C. Cytotopic (Cyto-) IL-15 as a New Immunotherapy for Prostate Cancer: Recombinant Production in Escherichia coli and Purification. Front Mol Biosci [Internet]. 2021;8. Disponible en: http://dx.doi.org/10.3389/fmolb.2021.755764

2. Fuentes Valencia MA, Gil Correa AC, Martínez Palacios CA, Baizabal Aguirre VM, Valdez Alarcón JJ. El enemigo de mi enemigo es… Un virus que ataca a las bacterias: los bacteriófagos. Rev Digit Univ [Internet]. 2021;22(4). Disponible en: https://www.revista.unam.mx/wp-content/uploads/v22_n4_a1.pdf

Técnica de PCR para el diagnóstico del Virus del Papiloma Humano (VPH)

Tema: Diagnóstico del virus del papiloma humano. 

Objetivo: Facilitar el diagnóstico de la infección por el virus del papiloma humano (VPH) mediante el uso de la técnica de PCR, la cual permite amplificar regiones específicas del ADN del virus.

Muestra: Raspado cervical.

Tipo de ácido nucleico extraído: ADN viral.

Gen o secuencia a amplificar: Región del gen viral L-1, utilizando indicadores universales MY09-MY11.

Tamaño en pares de bases del gel: 450 pares de bases (pb).

Tipo de PCR: PCR simple.

Visualización: Los productos amplificados se revelaron en gel de agarosa y se visualizaron mediante un sistema analizador de geles. Los resultados fueron cualitativos.

Método de extracción del ADN

Pasos: 

 -Preparación de las células: Las muestras fueron almacenadas en medio de transporte adecuado

 -Lisis: Se realizó lisis enzimática.

 -Separación/precipitación: Se utilizó la técnica de fenol-cloroformo para extraer y purificar el ADN.

Amplificación: Se usaron iniciadores universales MY09/MY1

Volumen de reacción: 50 µl.

Cantidad de ADN utilizada: 5 µl de ADN purificado.

Número de copias:Los productos amplificados (amplicones) es de 450 pares de bases. 

Hibridación: Se utilizó una temperatura de alineación de 58 °C durante 1:30 minutos por 40 ciclos.

Resultados: Se identificaron 341 genotipos en 207 pacientes, siendo los más frecuentes los genotipos 16 (10.3%), 52 (8.8%) y 59 (8.6%). Las infecciones múltiples estuvieron presentes en el 42.7% de los casos. 

Imagen obtenida de: https://www.scielo.org.mx/pdf/prh/v37n3/2524-1710-prh-37-3-115.pdf

Referencia Bibliográfica: 

1. García-Romero Carmen S., Soriano-Becerril Diana M., Sam-Soto Selene, Flores-Medina Saúl. Genotipificación del virus del papiloma humano en mujeres embarazadas VPH positivas. Perinatol. Reprod. Hum.  [revista en la Internet]. 2023 Dic [citado  2024  Dic  08] ;  37( 3 ): 115-121. Disponible en: https://www.scielo.org.mx/pdf/prh/v37n3/2524-1710-prh-37-3-115.pdf   

Alteración de la Epignética de la Diabetes Tipo 2

Alteración de la epigenética de la diabetes tipo 2

El polimorfismo VNTR (número variable de repeticiones en tándem) del trinucleótido CAG en el gen ATXN2 se asocia con alteraciones epigenéticas que contribuyen al desarrollo de la diabetes mellitus tipo 2. Este polimorfismo afecta la actividad del gen, implicando la regulación de proteínas como la ataxina-2, la cual influye en la resistencia a la insulina y la obesidad. Además, la metilación del ADN y otras modificaciones epigenéticas en este locus pueden contribuir a la disfunción metabólica y al riesgo cardiovascular.

Imagen obtenida de: https://es.123rf.com/photo_207003884_diagrama-de-esquema-de-explicaci%C3%B3n-anat%C3%B3mica-de-diabetes-tipo-2-y-resistencia-a-la-insulina.html 

Referencia Bibliográfica: 

1.	Cabrera Beltrán CJ, Castillo Solano FD. Polimorfismo (cag) del gen atxn2 como factor de riesgo relacionado con diabetes mellitus tipo 2. Revista Vive [Internet]. 2023;6(16) [citado 2024 Dic 1] :309–21.Disponible en: https://portal.amelica.org/ameli/journal/541/5414343028/5414343028.pdf