Técnica de PCR para el diagnóstico del Virus del Papiloma Humano (VPH)
Tema: Diagnóstico del virus del papiloma humano.
Objetivo: Facilitar el diagnóstico de la infección por el virus del papiloma humano (VPH) mediante el uso de la técnica de PCR, la cual permite amplificar regiones específicas del ADN del virus.
Muestra: Raspado cervical.
Tipo de ácido nucleico extraído: ADN viral.
Gen o secuencia a amplificar: Región del gen viral L-1, utilizando indicadores universales MY09-MY11.
Tamaño en pares de bases del gel: 450 pares de bases (pb).
Tipo de PCR: PCR simple.
Visualización: Los productos amplificados se revelaron en gel de agarosa y se visualizaron mediante un sistema analizador de geles. Los resultados fueron cualitativos.
Método de extracción del ADN
Pasos:
-Preparación de las células: Las muestras fueron almacenadas en medio de transporte adecuado
-Lisis: Se realizó lisis enzimática.
-Separación/precipitación: Se utilizó la técnica de fenol-cloroformo para extraer y purificar el ADN.
Amplificación: Se usaron iniciadores universales MY09/MY1
Volumen de reacción: 50 µl.
Cantidad de ADN utilizada: 5 µl de ADN purificado.
Número de copias:Los productos amplificados (amplicones) es de 450 pares de bases.
Hibridación: Se utilizó una temperatura de alineación de 58 °C durante 1:30 minutos por 40 ciclos.
Resultados: Se identificaron 341 genotipos en 207 pacientes, siendo los más frecuentes los genotipos 16 (10.3%), 52 (8.8%) y 59 (8.6%). Las infecciones múltiples estuvieron presentes en el 42.7% de los casos.
Imagen obtenida de: https://www.scielo.org.mx/pdf/prh/v37n3/2524-1710-prh-37-3-115.pdf
Referencia Bibliográfica:
1. García-Romero Carmen S., Soriano-Becerril Diana M., Sam-Soto
Selene, Flores-Medina Saúl. Genotipificación del virus del papiloma humano en
mujeres embarazadas VPH positivas. Perinatol. Reprod. Hum. [revista en la
Internet]. 2023 Dic [citado 2024 Dic 08] ; 37( 3 ):
115-121. Disponible en: https://www.scielo.org.mx/pdf/prh/v37n3/2524-1710-prh-37-3-115.pdf
