ADN Recombinante Artificial en el Cáncer de Próstata y Ácidos Nucleicos Recombinantes en la Naturaleza.

ADN recombinante artificial en el cáncer de próstata.

Tema: IL-15 citotópica (cito-) como nueva inmunoterapia para el cáncer de próstata: producción recombinante en Escherichia coli y purificación.

Objetivo: Mejorar los métodos de producción y purificación de una variante recombinante modificada de la IL-15 humana, y evaluar la eficacia de la proteína obtenida en el tratamiento de tumores de próstata.

Gen o secuencia a clonar: Gen cito-IL-15 

Enzimas de restricción: Nde I y Hind III

Enzima ligasa: No se especifica 

Vector: Vector de expresión pET30a

Célula receptora: Procariota- Escherichia coli BL21

Mecanismo de transferencia o inserción del gen: Por medio de choque térmico se da la transferencia de Escherichia coli BL21

Métodos de identificación de clones: Los clones positivos fueron seleccionados y cultivados a 37 °C con agitación a 180 rpm en matraces Erlenmeyer de 2 litros que contenían 440 ml de medio terrific broth (TB) suplementado con 30 μg/ml de kanamicina. Cuando la densidad óptica (DO) a 600 nm alcanzó un valor de 0,6, las células se enfriaron a 4 °C durante aproximadamente 15 minutos, se indujeron con 0,5 mM de isopropil β-d-1-tiogalactopiranósido (IPTG) y se incubaron a 16 °C por 16 horas bajo agitación a 180 rpm. Posteriormente, las células fueron recolectadas mediante centrifugación a 2500 x g durante 10 minutos.

Imagen obtenida de: https://www.frontiersin.org/files/Articles/755764/fmolb-08-755764-HTML/image_m/fmolb-08-755764-g002.jpg

Ácidos nucleicos recombinantes en la naturaleza.

Los bacteriófagos, como el fago Lambda que infecta a E. coli, contienen material genético (ADN o ARN) protegido por una cápside. Durante el ciclo lisogénico, el fago Lambda inyecta su ADN en la bacteria, donde se integra en una región específica del cromosoma. En esta combinación los ácidos nucleicos recombinantes emergen cuando el material genético del bacteriófago se integra en el genoma de la bacteria, llamada profago, se replica junto con el ADN bacteriano durante la división celular, asegurando su propagación.

Imagen obtenida de: https://www.revista.unam.mx/wp-content/uploads/v22_n4_a1.pdf

Referencias Bibliográficas: 

1. Esteves AM, Papaevangelou E, Smolarek D, Dasgupta P, Galustian C. Cytotopic (Cyto-) IL-15 as a New Immunotherapy for Prostate Cancer: Recombinant Production in Escherichia coli and Purification. Front Mol Biosci [Internet]. 2021;8. Disponible en: http://dx.doi.org/10.3389/fmolb.2021.755764

2. Fuentes Valencia MA, Gil Correa AC, Martínez Palacios CA, Baizabal Aguirre VM, Valdez Alarcón JJ. El enemigo de mi enemigo es… Un virus que ataca a las bacterias: los bacteriófagos. Rev Digit Univ [Internet]. 2021;22(4). Disponible en: https://www.revista.unam.mx/wp-content/uploads/v22_n4_a1.pdf